大皿提蛋白先用裂解液把细胞捣碎，死细胞要不要收看情况。裂解液浓度调到1%左右，加冰水降温，搅拌机转3000转/分钟搅10分钟。如果细胞没完全裂解，死细胞会堵住滤膜；要是裂解过度，蛋白会变性。这时候要看上清液有没有浑浊，浑浊多就收死细胞，清亮就别收。

为什么裂解液浓度要定在1%？因为浓度太低（比如0.5%）细胞壁太硬，蛋白提取率低30%以上；浓度太高（2%以上）会破坏蛋白结构，得重新做。离心时转速别超3500转/分钟，时间别超过15分钟，否则细胞碎片会结块。比如用1% NP-40裂解液，冰浴30分钟，离心3000转/分钟10分钟，上清液蛋白浓度能到2mg/ml。要是收死细胞，离心后倒掉上清，沉淀用裂解液洗两遍，蛋白损失能减少20%。但洗多了反而会洗掉目标蛋白，所以得看具体实验效果。