亲和色谱柱主要是用抗体把蛋白固定在柱子填料上，然后让样品流过柱子，目标蛋白会跟抗体粘住，其他杂质就流走了。接着用不同浓度的洗脱剂把蛋白洗下来，检测洗脱下来的蛋白有没有纯化好。整个过程分三步：固定、洗脱、检测。

为什么是这个流程呢？因为亲和色谱柱的关键是抗体特异性结合，比如用抗IgG抗体就能精准抓取免疫球蛋白。有研究显示，这种柱子对目标蛋白的结合效率能达到85%-95%，洗脱剂浓度通常从低到高逐步增加，比如先0.1M甘氨酸，再0.5M，1M。但要注意洗脱太猛会破坏蛋白结构，所以得控制pH和离子强度。比如有人用pH3.0的 glycine 洗脱，洗脱率在90%以上，但回收率可能掉到70%-80%。柱子寿命也跟流速有关，太快会冲掉蛋白，太慢又费时间。所以一般流速控制在1mL/min左右，柱床体积1.5mL的话，整个过程大概30分钟到1小时。检测用BCA法测浓度，或者SDS-PAGE看纯度。