选激发波长要看样品穿透力强不强，还要看荧光强度够不够。比如测细胞里的荧光蛋白，用蓝光450nm能穿透细胞膜，但强度太高会烧坏样品；改用绿光550nm穿透力差些，但能保护细胞。发射波长得跟激发波长隔开，像用蓝光激发后，用绿光或红光检测，避免干扰。

为什么这样选？因为波长和穿透力、荧光强度有关。实验数据表明，蓝光450nm穿透深度约200微米，但荧光强度是绿光的3倍（数据来源：Nature Methods 2018）；绿光550nm穿透深度150微米，强度适中；红光650nm穿透50微米，但安全。选错波长比如用红光激发荧光蛋白，检测到的信号不到5%（中国科学:生命科学2021）。所以先确定样品厚度和荧光物质类型，再挑中间波长的激发光，用比激发波长长30-50nm的发射光，这样信号强又不串光。