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如何选择蛋白上样量-蛋白上样一般上多少

2025-11-08 23:47:50  

如何选择蛋白上样量-蛋白上样一般上多少

优质解答

蛋白上样量就是往电泳板里加的蛋白总量啊。一般选10到50微克就行,像普通抗体的话10微克就能显条带,但抗体敏感度高的可能得加到30微克。加太多条带会太宽看不清,太少可能检测不到信号。

为什么得这么选呢?因为蛋白浓度和电泳条带亮度直接挂钩啊。比如文献里说啊,当上样量超过50微克时,条带宽度会扩大2到3倍,这时候背景噪音也会跟着涨。而像用ECL化学发光这种高灵敏度检测法,10微克就能达到0.1ng的检测限。不过要是用普通ECL可能得加到20微克,像用辣根过氧化物酶标记的抗体,可能连5微克都显不出条带。所以得根据抗体敏感度、检测方法和蛋白总量来配比,像做Western Blot的时候,1-2%的蛋白上样量就够用了。

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蛋白上样量上样量选择