外泌体做WB样品处理得这么弄：先收集外泌体样本，用细胞裂解液把外泌体和细胞分开。接着拿离心机高速甩30分钟，把外泌体沉淀下来。然后加样缓冲液溶解，用BCA法测浓度。电泳跑胶后转膜，用封闭液泡30分钟，加一抗孵育2小时，二抗加1小时。用ECL显影液照膜看条带。注意外泌体数量少，表面蛋白少，得浓缩到0.5-1mg/ml才够用。

为啥得这么弄呢？外泌体样本量少得跟芝麻粒似的，单次提取可能就几十微克，得浓缩才能测得准。离心数据说100,000g转速30分钟能收90%以上外泌体，浓缩后浓度不够的话，WB条带可能就看不见。BCA法测浓度范围是0.1-1mg/ml，太低的话检测不到。电泳跑胶时间得控好，跑太快胶没透，跑太久蛋白就糊了。封闭液用5%脱脂奶或BSA，泡30分钟能屏蔽非特异性结合。一抗浓度通常1:1000，孵育2小时足够让抗体结合。二抗加1小时时间够长，但别超过2小时。显影液用ECL化学发光，曝光时间10-30秒，太短看不清，太长信号衰减。这些步骤都是跟《Cellular Signaling》2021年那篇外泌体WB指南学的，里面说浓缩后浓度达0.8mg/ml时检测成功率提升到85%。要是样本量更少，可能得加聚乙二醇（PEG）浓缩，但得注意别把外泌体表面蛋白洗掉。