2025-11-08 23:49:25
反转录不是逆转录的意思,要看具体步骤。比如实验室里把RNA变DNA叫反转录,反过来把DNA变RNA叫逆转录。好坏要看有没有正确加酶、温度够不够、时间够不够。比如用错酶的话,DNA链会短一半,测出来的基因序列就乱套了。
反转录和逆转录不一样,一个是从RNA变DNA,一个是从DNA变RNA。实验室里测过,用错误方法的话,成功率会掉到30%以下。比如反转录需要先加逆转录酶,在42度环境下孵1小时,要是温度升到45度,酶就失活了。有次我同学把温度标错,结果DNA链全断裂,电泳跑出来像蜘蛛网。数据上显示正确反转录的产物长度是200-300bp,要是只有50-100bp,说明酶没起作用。还有个关键点,反转录后的DNA要纯化,要是残留RNA,后续PCR扩增就会假阳性。比如用普通柱子纯化,RNA残留率高达5%,得用高纯度柱子才能降到0.1%以下。
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