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如何给上样蛋白稀释-蛋白上样量多少合适

2025-11-08 23:49:32  

如何给上样蛋白稀释-蛋白上样量多少合适

优质解答

先稀释再上样量别太多别太少,浓度太高会糊条带,太低显不出信号。比如跑胶时条带太宽或太细都不行,稀释后取10-20微克上样最稳当。

为啥是这个量呢?稀释能让蛋白浓度均匀,上样时液态体积大容易铺展均匀。实验数据说0.5-1毫克每毫升浓度最合适,取10微克到20微克刚好。比如稀释到1mg/ml,取20微克就是20微升,刚好能铺满 wells又不溢出。浓度太高比如2mg/ml,上样20微克就会变成40微升,液态体积翻倍容易糊掉。浓度太低比如0.3mg/ml,20微克只有6微升,铺展太稀条带太细看不清。文献里说超过25微克上样,条带宽度会超过迁移率误差范围30%,这时候电泳结果就不准了。所以稀释到合适浓度再定量取样,就像调汤水咸淡,先加水再放调料,量太猛就 messed up。

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蛋白稀释蛋白上样量