很多人刚开始做细胞培养都会纠结小皿该加多少细胞。一般来说六孔板小皿每孔放10^5到10^6个细胞最合适，贴壁细胞传代时可以少放一点，悬浮细胞可以多放一点。比如做细胞传代的时候，如果加太多细胞，就会挤占彼此生长空间，导致细胞死亡或者增殖缓慢。而加太少的话，培养皿底面积浪费大，细胞铺不均匀，影响实验结果。

为什么是这个答案呢？因为细胞增殖速度和密度直接相关。根据《细胞培养技术手册》数据，当细胞密度超过10^6个/毫升时，代谢产物会快速积累，导致pH值下降。比如某实验室用3×10^5个/毫升密度培养HeLa细胞，72小时贴壁率92%，而5×10^6个/毫升时贴壁率只有68%。所以既要保证细胞充分贴壁，又要留出足够空间让新细胞分裂。另外不同细胞类型也有差异，比如原代细胞需要更高密度（1.5×10^6个），而永生化细胞可以接受更高密度（2×10^6个）。实验前建议先做预实验，用不同密度梯度验证最佳值。