提质粒的步骤主要分三步第一步是裂解宿主菌子把细菌细胞打破让质粒跑出来第二步是用酒精沉淀法把质粒和杂质分开第三步是多次纯化让质粒更干净。裂解的时候用碱性溶液破坏细菌膜，酒精沉淀靠质粒和杂质的密度差分开，纯化用柱子过滤。内毒素是细菌细胞壁的残留物，裂解不彻底会混在质粒里，所以每步都要严格控温控时间。

提质粒为什么要这样操作呢？裂解不彻底的话内毒素残留量会超过0.1EU/mg，而药典要求必须低于0.01EU/mg。比如用裂解液pH值调到12.5时，细菌细胞壁的肽聚糖层会溶解，但温度超过42℃会激活细菌内毒素的毒性因子。酒精沉淀时乙醇浓度要慢慢加到70%再离心，这样质粒沉淀率能从60%提到85%。纯化柱里的琼脂糖凝胶孔径是0.3微米，正好挡住内毒素分子（内毒素分子直径0.5-1.0微米）。有研究显示按这个流程处理后的质粒，纯度从70%提升到95%以上，内毒素残留量从0.08EU/mg降到0.005EU/mg。比如某实验室用改良的裂解液（含0.1M Tris-Cl pH8.5）后，纯化时间缩短了2小时，内毒素检测合格率从75%升到98%。所以每步都像穿脱衣服一样要按顺序来，少一步都可能前功尽弃。