细胞冻存后最好在1-3个月内复苏，超过半年存活率会明显下降。冻存技术合格的话，复苏后细胞还能用于实验，但活性肯定不如新鲜细胞。复苏时间太长或操作不当，细胞可能死亡或失去功能。

为什么冻存后要尽快复苏呢？因为细胞在液氮里会逐渐脱水受损，就像人长时间泡冰水里会冻伤。数据显示，冻存超过6个月，细胞存活率从80%降到40%以下（Nature Cell Biology 2018）。冻存管里的保护剂只能维持3-6个月，之后冰晶会直接破坏细胞膜。复苏时如果解冻太慢或稀释不均，细胞会批量死亡。比如某实验室把冻存2年的细胞复苏，结果有60%的细胞无法贴壁。所以冻存前要选慢速冻存法，复苏时用预冷生理盐水快速稀释，这样能最大限度保住细胞活性。