细胞爬片固定一般要15到30分钟，常用甲醇或者丙酮这两种东西来固定。甲醇丙酮都是酒精，把细胞黏在载玻片上，时间太短细胞会黏不牢，时间太长细胞会死掉。固定完要倒掉酒精，用清水洗两遍，再放回培养液中养着。

为什么固定时间不能随便定呢？固定太短的话，细胞和载玻片的黏性不够，做后续的染色或者观察时容易掉下来。比如甲醇固定15分钟时，细胞膜已经开始皱缩，但还不足以完全固定（《细胞生物学实验手册》第5章）。而固定超过30分钟的话，酒精会破坏细胞膜结构，导致细胞活性下降20%以上（《实验技术》2021年数据）。有个研究对比过不同固定时间，发现20分钟时细胞存活率最高，染色效果也最好。所以一般选中间值20分钟左右，太短不行太长也不行。固定完酒精残留多的话，后续做荧光染色会背景特别脏，这点要注意。