提质粒需要多少菌液要看质粒大小和提取方法，一般200-500毫升足够。菌液不用必须新鲜，但新鲜的可能提取效率更高。比如用大肠杆菌，当菌液 OD600 值在0.6-1.0时，DNA含量最合适。如果菌液放太久，细胞壁可能变硬，提取质粒时容易碎裂。不过冷冻保存的菌液只要不超过两周，提取效果也差不多。

为什么是这个答案呢？首先菌液浓度和质粒量直接相关，500ml OD600 1.0的菌液大约有10微克质粒，足够做5个克隆。但浓度太低（比如100ml OD600 0.3）可能提取不到足够质粒。其次新鲜菌液细胞活性强，裂解更彻底。实验数据显示，新鲜菌液提取的质粒A260/A280比值比陈旧菌液高0.1-0.2，说明纯度更好。不过冷冻菌液如果反复冻融，细胞膜结构会破坏，反而降低提取率。所以建议现做现用，但短期保存也行。