好多小伙伴在提取RNA的时候，都会纠结加多少氯仿要等几分钟。简单说就是加到总体积的50%-60%左右，然后盖好盖子放两到三分钟。这时候液体会出现分层，上层是RNA，下层有蛋白质沉淀，中间是油层对吧？

为啥是这个比例和时间呢？首先氯仿浓度越高，能更快把细胞膜和蛋白质裂解掉，但加太多会直接把RNA从水相里拽出来。根据《分子生物学实验指南》的数据，当氯仿体积超过总液体的60%，RNA得率会下降15%以上。就像你倒太多醋到鸡蛋里，蛋白全凝固了。静置时间太短的话，蛋白质还没完全沉淀，容易混着RNA；但超过五分钟，氯仿会开始分解RNA，就像煮鸡蛋时间太长会变硬一样。实验证明两到三分钟刚好让大部分蛋白质沉下去，同时保护RNA不被破坏。记得每次加氯仿都要轻轻上下颠倒混匀，别摇太猛，不然RNA容易粘在管壁上。