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脂肪酶的分子量怎么测-脂肪酶实验

2025-11-08 23:54:25  

脂肪酶的分子量怎么测-脂肪酶实验

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要测脂肪酶的分子量,先得把酶提纯出来。把脂肪酶从混合物里分离出来后,用SDS-PAGE电泳法看条带位置。电泳是把蛋白质按分子量大小排成条带的,条带越靠近阴极分子量越小。然后拿标准蛋白对照,比如看见条带和50kDa标准蛋白一样高,那这个酶的分子量就是50kDa左右。用质谱法测更准,把酶样本电离后分析质谱图,直接得到精确分子量数值。

为什么这样做?因为蛋白质分子量越大,在电泳时移动越慢。比如实验数据显示,分子量30kDa的酶条带在电泳槽跑20分钟就到底部,而100kDa的酶要跑50分钟。质谱法测的是酶分子离子的质荷比,比如某脂肪酶质谱显示m/z 5800,换算成分子量就是58kDa。但电泳法受样本浓度影响大,浓度高条带会变粗,所以先用电泳粗略判断,再用质谱精确验证。实际操作中,电泳跑完条带后要马上拍照记录,过夜条带会变模糊。比如某次实验,电泳条带24小时后出现拖尾,导致误判分子量,后来改用预染蛋白 marker 后准确率提升到95%。

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脂肪酶分子量测定