调波长旋钮转到样本颜色最深的位置，再观察载玻片上的荧光点是否均匀。如果颜色发黄或发蓝，说明波长不对，需要微调旋钮，每次调1-2圈，等5分钟让滤镜稳定，再观察效果。调完波长后，用黑色纸盖住光源，看载玻片是否只剩暗斑，说明波长精准。

为什么这样调？因为荧光显微镜的滤镜有固定波长范围，比如DAPI染料吸收450nm左右的光，Cy5染料吸收640-670nm的光。调不准波长，会导致两种问题：一是染料没吸收到足够光，荧光变暗（比如把450nm的DAPI调到500nm，吸收率下降30%）；二是杂散光进入，背景变亮（波长偏移10nm，背景光增加5倍）。实验数据显示，波长偏差超过5nm时，成像对比度会下降40%以上。所以必须先粗调到样本颜色最深，再细调到黑色暗斑，这样既能保证信号强，又能减少背景干扰。等5分钟，是因为滤镜刚换波长时，光学元件还没完全散热，导致光通量不稳定。