柱层析流分接数量根据样品量和柱效定每管10-30微流分接数量根据样品量和柱效定每管10-30微。流动相选择要兼顾溶解性和洗脱能力常用梯度或等度法选择流动相要兼顾溶解性和洗脱能力常用梯度或等度法。比如100毫克样品用1.5万柱效的柱子接10管每管10微就是留20微流动相缓冲液。流动相pH和离子强度影响分离效果实验显示pH3-7时分离度提高15%离子强度每增0.1M分离度降8%。

流动相选择要考虑样品溶解度先测溶解度再配流动相比如黄酮类用甲醇-水1:1溶解度好。接样量计算公式是总样品量除以每管接样量再留20%缓冲液比如100毫克样品接10管每管10微就是100微总接样量留20微就是120微流动相。文献说pH4.5时分离度最好比pH3时高18%离子强度0.05M时分离度比0.1M时高12%。接样管数太多会导致柱压太高比如接20管时柱压比10管高3倍可能压裂柱子。流动相梯度变化速度要慢比如每小时只变5%浓度就能保证分离效果。