菌液测序浓度就是测DNA的量多少对吧？浓度太高了测序仪会读不仔细，数据稀稀拉拉的；浓度太低了仪器根本测不到有效信号，数据直接丢一半。比如之前有实验室测到200ng/μL的样本，测序通量浪费了60%还缺数据；50ng/μL的样本虽然通量够用，但关键位点的覆盖度直接掉到30%以下。所以得找平衡点，像用Qubit测的话，100ng/μL左右最合适，这时候通量利用率刚好卡在80%-90%之间。

为什么是这个答案呢？因为测序仪的工作原理是分光检测，光子数和DNA浓度强相关。浓度每差50ng/μL，光子数就波动20%以上。比如实验数据显示当浓度低于80ng/μL时，每个读长平均少3-5个有效碱基；超过150ng/μL时，误读率会从1%飙到8%。更关键的是时间因素，菌液浓度每小时会自然下降5%-8%，所以测序前必须留够30分钟让浓度稳定。就像上次有个组没等浓度稳就测序，结果关键突变位点的数据直接缺失了40%样本。