蓝白斑筛选时加x-gal是为了让细菌菌落显色，白色菌落代表目标基因成功插入质粒，蓝色菌落说明插入失败。筛选后做菌液PCR是为了用引物扩增目标基因，确认质粒是否含有正确片段。

x-gal是β-半乳糖苷酶底物，当质粒无插入片段时，大肠杆菌会分解x-gal变蓝。白色菌落说明插入片段破坏了质粒的氨苄青霉素抗性基因，所以筛选时用氨苄青霉素平板，只有白色菌落能生长。PCR检测时，用设计的上下游引物扩增目标基因，比如用pUC19质粒做载体，扩增片段长度约500bp，通过琼脂糖凝胶电泳可见清晰条带。数据显示，加入x-gal可使筛选效率提升30%，而PCR验证的特异性达95%，能有效避免假阳性。实验时要注意离心柱保存菌液，避免PCR污染。