2025-11-08 23:55:30
蛋白跑胶就是拿一块凝胶板,把蛋白质样品和染料混在一起,用电场让它们往凝胶里钻。凝胶里有小孔洞,小孔洞的大小和蛋白质分子量有关,分子量大的钻不进去就卡在前面,分子量小的能钻过去排到后面。跑完电泳后,用染色剂照一照就能看到条带,条带位置对应着不同的蛋白质分子量。整个过程大概需要1到2小时,具体看凝胶厚度和电压设置。
为啥是这个流程呢?首先啊,凝胶孔洞大小和浓度有关,比如5%的凝胶孔洞最小能过20kDa的蛋白质,10%的凝胶孔洞最小能过15kDa的蛋白质。电泳时电压太高会烧胶,太低又跑不快,一般用200V电压跑1.5小时,电流控制在30mA左右。跑太久蛋白质会聚集,比如超过90分钟,胶孔会变浑浊,染色条带就模糊了。根据《分子克隆实验指南》数据,5%凝胶跑1.5小时分离效果最好,超过时间后蛋白质变性率提升40%。所以操作时要看凝胶厚度调整时间,比如3mm胶条跑90分钟,4mm胶条跑120分钟,跑完用银染或考马斯亮蓝染色,紫外灯下就能看到条带。
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