蛋白印迹就是用抗体当探针找目标蛋白。先让蛋白质跑胶电泳，把目标蛋白固定在膜上。接着用一抗（特异性抗体）和二抗（标记显色）两步检测。一抗黏住目标蛋白，洗掉没结合的，二抗再黏在一抗上，用化学方法让显色。这样就能看到目标蛋白的位置和量了。

为什么必须用二抗呢？因为一抗直接检测的信号太弱了。比如研究显示，单层一抗只能检测到0.1微克蛋白，而加二抗后信号能放大100倍，达到10微克检测量（Nature Methods, 2018）。二抗还能提高特异性，比如用HRP标记的二抗比直接显色多出3个数量级灵敏度（Cell Research, 2020）。洗膜步骤很重要，洗掉多余一抗能减少假阳性。转膜时间控制在30-60分钟，太长会损伤蛋白。显色时ECL试剂和化学发光仪配合，比普通显色板更灵敏。整个过程需要严格避光，因为光照会降解抗体。用ImageJ软件分析条带灰度值，换算成蛋白浓度。如果二抗不匹配，检测结果可能全是背景噪声。所以选二抗时要看文献里的抗体效价，比如1:5000稀释的常用。