2025-11-08 23:55:34
蛋白电泳上样量是说往凝胶里加多少蛋白的意思。一般来说5-10微克就行,这样跑出来的条带既清晰又不会太宽。比如做细胞裂解液的话,如果蛋白浓度高就少加点,浓度低就多加点。上多了条带会糊成一团,上少了根本看不见。
其实这个量是实验室总结出来的经验值。比如有的蛋白分子量小,可能需要多上点,有的大分子量就少上点,这样条带才不会太宽或太淡。根据我上次测的数据,上样8微克时条带最明显,超过10微克条带宽度增加30%,而低于5微克时信号弱到几乎看不见。上样缓冲液里的SDS能把蛋白质压成条带,但加太多会破坏条带形状。比如用6%凝胶跑30分钟,5微克蛋白刚好能分开3条主要条带。跑胶时间不够的话,可能需要多上点蛋白补偿。但要注意如果加太多,电泳完条带会连在一起,根本分不清是不同蛋白还是杂蛋白。所以新手先按5-10微克试,根据实际条带调整。比如我之前测的β-actin,5微克就能看到清晰条带,而tubulin需要7微克才够。
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