2025-11-08 23:55:34
上样量大概一百到一千纳克就能被检测到。浓度太低条带太淡看不清,太高会拖尾影响判断。比如用1.5%琼脂糖凝胶,100ng到1μg之间条带最清晰。电泳时间三十分钟到四十分钟,电压设置六伏每毫米。如果电泳条带模糊,可以增加上样量到五百到五千纳克试试。
因为浓度太低的话,核酸片段在凝胶里分布不均匀,就像撒芝麻糊太稀了看不清颗粒。根据实验数据,当浓度低于100ng时,条带信号可能弱到检测不到。比如用Sybr Green染料,检测下限是50ng,但实际操作中建议上样量至少翻倍。浓度过高超过5μg的话,大片段会拖尾,比如DNA片段超过10kb就会拖出额外条带。比如某实验室测试发现,500ng到2μg的上样量在1.2%凝胶里效果最好,电压8V/cm电泳35分钟条带最明显。这时候如果看到清晰的S型条带,说明浓度合适。如果条带太宽或拖尾,说明浓度太高需要稀释。所以上样量要拿捏好,既要保证能看见,又不能让条带变形。
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