2025-11-08 23:55:36
梳孔能上多少蛋白啊,就是说往凝胶的梳孔里加多少蛋白液能跑好条带。比如SDS-PAGE里,梳孔一般放5-10微升级的蛋白液,多放就糊条,少放条带弱。那蛋白和蛋白液的区别是,蛋白是纯的,蛋白液可能带缓冲液,加多了会压住条带。
为啥是这个量啊,因为凝胶孔径和电泳时间决定的上样量。比如12%的凝胶,跑1.5小时,一般每孔10微升级蛋白液最合适。数据来源是《分子克隆实验指南》第4版,里面说10微升级含30μg蛋白,刚好让条带在中间位置。要是加15微升级,条带会跑到底部发灰;加5微升级,条带又跑到顶部看不清。还有个关键点,蛋白液里的盐分不能超0.1M,不然会跑慢或者条带断裂。所以实际操作得先测浓度,再算量,比如用BCA法测好蛋白浓度,再算10微升级能加多少克蛋白。
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