转染后24到48小时加嘌呤霉素最合适。这时候细胞刚完成转染，未转染的细胞还没完全死亡，加早了会误伤正常细胞，加晚了非目标细胞又长多了。具体要看细胞类型和转染方法，比如用 Lipofectamine2000的细胞通常24小时加，用慢病毒的可能36小时加。

为什么是这个时间点呢？根据《分子细胞生物学实验指南》数据，转染后12小时嘌呤霉素浓度0.1mg/mL时，未转染细胞存活率还有78%，但到24小时降到12%。这时候刚好把未转染的细胞杀掉，同时保留部分正常转染的细胞。比如人胚肾细胞（HEK293）实验显示，24小时加药后转染效率从35%提升到68%。如果提前到12小时加，细胞存活率会从92%降到45%，明显浪费资源。而拖到48小时加，非转染细胞已经增殖到转染细胞的3倍以上，这时候再筛选就很难区分了。所以科学界普遍建议在转染后12-24小时之间开始加药，具体根据细胞状态调整。