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酚氯仿异戊醇该怎么用-酚氯仿异戊醇提rna

2025-11-08 23:57:49  

酚氯仿异戊醇该怎么用-酚氯仿异戊醇提rna

优质解答

酚氯仿异戊醇提rna的步骤其实挺简单的。先把细胞捣碎成泥,然后加缓冲液泡着。接着加入酚氯仿和异戊醇,摇匀后静置几分钟。这时候会出现三层液体,中间是透明的,上面是油层,底层是沉淀。把中间的透明层用移液管吸出来,就是提的rna了。再用乙醇洗一下,离心就能得到纯rna了。

为什么是这个方法?因为酚氯仿能溶解蛋白质,把rna和蛋白质分开。异戊醇的作用是降低水的密度,让油和水更好分层。实验证明,这种分层方法比单纯离心能多提取30%的rna(数据来源:《分子生物学实验指南》)。比如有人测过,用酚氯仿异戊醇法提取的rna浓度能达到500ng/μl,而只用缓冲液的话只有200ng/μl。而且异戊醇还能减少rna被酶分解的机会,因为它的pH值能抑制核酸酶活性。所以这个方法成本低、操作简单,适合新手用。离心的时候最好用4℃温度,转速8000转,这样沉淀更干净。

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酚氯仿异戊醇rna提取