液体柱层析实验分四步走。第一步装柱子，把细玻璃柱装满小颗粒填料，柱子要垂直放稳。第二步装样品，用细针小心把液体样品挤进柱子顶端，不能直接倒。第三步洗脱，用不同浓度的溶剂慢慢流过柱子，把不同物质洗下来。第四步收集，洗脱液每管接一点，看哪个管有目标物质就记下来。

装柱子要固定填料是因为填料颗粒大小直接影响分离效果。比如文献说填料直径0.3-0.5毫米时，分离效率最高，颗粒太粗会漏液，太细会堵塞。装样品用细针是为了防止大颗粒堵住柱子，实验发现直接倒的话有40%概率出现柱子堵塞。洗脱时用不同浓度溶剂，是因为目标物质在不同溶剂里溶解度不同，比如苯酚在乙醇里溶解度随乙醇浓度增加而上升，这样能更好分开物质。收集时每管接1毫升，实验数据显示间隔收集比连续接更准，误差能缩小到5%以内。