酵母双杂交实验一般要三到五天才能看到显色，具体时间要看培养温度、菌株活性、质粒纯度这些因素。显色出现说明目的蛋白成功结合了，这时候才能继续后续步骤。比如实验室记录显示，在30℃恒温培养箱里放四天左右，白色菌落周围会出现蓝色斑点，但有个别样本可能需要多养两天。

为什么是这个时间呢？酵母菌自己繁殖要两三天，加上蛋白表达和检测时间，总共差不多一周。有实验室统计过，用Y2H系统的话，成功显色需要72-120小时（三到五天），失败样本多是因为质粒质控不严或者培养温度波动。比如某篇论文提到，质粒携带的GAL1启动子需要48小时启动表达，而蓝色底物X-GAL分解显色又需要24小时。所以整个过程至少得72小时，但遇到问题多的话可能拖到五天。培养箱温度每低一度，显色时间就多八小时，这也是为什么要求恒温25℃的原因。