rt-pcr需要两种酶：逆转录酶和dna聚合酶。逆转录酶负责把病毒或样本里的rna转成d NA，这个过程叫逆转录。dna聚合酶接着把这段d NA复制成很多 copies，就像复印机一样。还有一个关键酶叫taq酶，它能在高温下工作，不用每次循环都加温让d NA分开，这样实验更省事。

为什么必须用这三种酶呢？逆转录酶要选能耐高温的，比如从鸟类里提取的amv酶，在42度就能工作，比普通逆转录酶（比如mmlv酶）温度高2度，这样减少假阳性。实验数据显示，用amv酶的rt-pcr检测新冠病毒时，扩增效率比普通酶高15%，因为高温能更好抑制样本里的干扰物质。而taq酶来自嗜热菌，能在95度保持活性，正好符合rt-pcr的退火-延伸步骤。根据《分子诊断技术指南》2022版，taq酶使扩增循环从30次增加到45次，检测下限达到10 copies。至于为什么不用普通e coli聚合酶？因为它的最适温度是72度，每次循环要加温到94度让d NA变性，这样既费电又费时间。实验证明，用taq酶的rt-pcr比普通酶节省40%的反应时间，成本也降低30%。