Ficoll PM400配比是1份加3份缓冲液，比例1:3。先倒Ficoll，再缓慢加缓冲液，边加边搅拌。定容到总体积，分装保存。分装后要放4度，放4度保存。搅拌时要慢，快了会破细胞。分装用50ml离心管，装满到管口下1cm。保存时间别超1个月，超了就废了。

为啥是这个比例？因为Ficoll密度1.077g/cm³，比生理盐水0.9g/cm³高，密度差能让细胞沉下去。根据斯托克斯沉降公式v=2r²(ρ-ρ液)g/9η，细胞半径r越大、密度差越大、缓冲液粘度η越小，沉降越快。按1:3配比时，缓冲液体积足够让细胞分层，避免Ficoll结块。实验数据显示，1:3比例分离人外周血单个核细胞纯度达85%以上，而1:2比例纯度只有72%。分装时管口下1cm是为了留空间，防止冻存时管子胀裂。保存温度4度能抑制微生物，但别超过1个月，因为Ficoll会吸收管壁成分，导致密度变化。搅拌太慢细胞会死，太快会破膜，所以得边加边慢搅。离心时转速1500转/分，时间10分钟，这样刚好让细胞沉下去又不压碎。