第一链cDNA变成双链cDNA再变回单链cdna分三步走。第一步用逆转录酶把RNA当模板合成了互补链，这时候就有两条链了。第二步这两条链在高温下解开了，变成两条分开的单链。用碱处理让其中一条链保持完整，另一条链被分解掉。整个过程就像先织毛衣再拆掉一半，剩下一半没拆的。

为什么是这个答案呢？因为逆转录酶确实能以RNA为模板合成互补DNA链，这个过程在42℃最活跃，实验数据显示效率能达到90%以上。高温解链是因为双链DNA在65℃以上会自动解旋，而单链保持完整需要立即降温。碱处理时氢氧化钠浓度控制在0.1mol/L，刚好能分解掉未保护的单链，但不会伤到已磷酸化的双链。就像煮鸡蛋要先用热水下锅再冷水剥壳，每个步骤都有特定条件支撑。