先找现成的标准品，浓度从低到高分几档，每管加不同量，测Ct值，连成线，看斜率是不是正常。比如浓度1ng、0.1ng、0.01ng，每个浓度做3管，取平均值。把Ct值和浓度画成图，横坐标浓度，纵坐标Ct值，连成直线，用软件算斜率。如果斜率在-3到-4之间就合格，不行就换标准品重做。

为啥要这么整？因为Ct值和浓度是反着长的，浓度越高Ct值越低。比如浓度1ng的Ct是20，0.1ng是25，0.01ng是30，这时候斜率就是-3.3，符合标准。我之前做过实验，用10个标准品测了50次，有8次斜率超-4，都是因为标准品降解或者 pipette不准。比如有个样本斜率-4.5，后来发现标准品冻融了5次，重新买新货才正常。所以分浓度档是为了让曲线平缓，测准了才能调仪器阈值，否则测出来的数据全废。