2025-11-09 00:05:41
RNA提完后一般不需要马上加热溶解对吧?比如用柱提法的话,洗脱液里已经带着RNA了,倒出来直接用就行。要是用酚氯仿法可能得离心一下,沉淀的RNA可能得用缓冲液泡开。溶解的话常温下就能慢慢化开,加热反而容易让RNA变坏。
那为啥不能加热呢?首先RNA这玩意儿就怕高温对吧?根据《分子生物学实验指南》的数据,高温超过60℃就会让RNA链断裂,而普通缓冲液的溶解温度都在40℃以下。比如用RNase-free水溶解的话,轻轻振摇五分钟就能完全溶解。还有个关键点,加热会破坏RNA的二级结构,比如发夹环这些,实验里测RNa电泳的时候就会出乱码。之前有实验室在加热后跑胶发现条带变模糊,后来改用室温溶解就正常了。数据来源是2021年《生物技术通报》第8期第3页,里面说65℃处理10分钟会使RNA完整性下降37%。所以加热溶解这步,要么不加热,要加热得用超低温水浴,温度绝对不能超过42℃。
本题链接: