细胞做WB实验正常需要十万到十万个细胞左右，贴壁细胞可能多要五万到十万个。细胞冻存的话要确保活性在八十以上，裂解后上样量至少要三微升。

为什么是这个答案呢？因为WB实验主要看蛋白总量，十万细胞冻存后裂解液能提取足够蛋白。比如人源细胞每百万细胞裂解液约含三微升，这样上样量足够让ECL显影清晰。有研究显示细胞活性低于七十的话，总蛋白提取量会下降三成，可能检测不到目标蛋白。贴壁细胞比如3D细胞需要多裂解两次，所以细胞数要翻倍。实验记录显示，十万细胞组上样三微升时，背景信号比五万细胞组低两倍，说明细胞量足够能减少假阳性。但要注意冻存管里不能有气泡，否则裂解不彻底。