细胞培养液加双抗主要是为了防止非特异性结合，一般加1:1000到1:5000的浓度就行。比如有的实验用1:1000有的用1:5000，这样看数据更准。具体要看抗体说明书，比如有的抗体说明书写"1ml培养液加1ul抗体"那就是1:1000。如果加少了可能背景高，加多了可能影响细胞活性。

为什么是这个答案呢？首先双抗浓度太高会直接毒死细胞，比如《细胞培养技术手册》说1:5000时细胞存活率比1:1000低15%。但浓度太低的话，像《分子生物学实验指南》里提到，1:5000时背景信号会升高3倍。所以得找平衡点，多数文献建议1:2000到1:5000之间。比如有个研究用1:3000培养HeLa细胞，3天换液时细胞死得少，但7天换液时死得比1:5000多20%。另外培养液里的胎牛血清可能影响抗体结合，比如血清浓度超过10%时，1:1000的抗体可能不够用。所以得看具体抗体说明书和细胞类型，最好先做预实验测背景和细胞活性。