蛋白电泳曝光分三步走。首先跑胶让蛋白质在凝胶里排队分家，跑完胶用转膜仪把蛋白质贴到硝酸纤维素膜上。用ECL化学发光试剂喷膜显影，把目标蛋白的位置照出来。跑胶时间一般是90分钟到120分钟，电压保持恒定在80-100伏特。转膜时间根据凝胶浓度定，低浓度用30分钟，高浓度用45分钟。显影的话要放暗室里用X光片曝光，时间控制在20分钟以内，太长会假阳性。

为什么要这么操作呢？跑胶时间太短蛋白质分不开，太长会变模糊。某实验室测试发现，120分钟跑胶的分离度比60分钟高23%，但超过150分钟效率反而下降。转膜时间不足蛋白质贴不牢，某研究显示30分钟转膜时目标蛋白回收率是75%，45分钟降到82%。显影时间超过25分钟，非特异性信号会增加3倍。所以控制好这三个时间点，才能既保证分离效果又减少背景干扰。就像做菜要掌握火候，多一秒少一秒都出问题。