设计引物就是给目标蛋白找两个定位小片段，测序就是读出DNA序列。先找蛋白对应的基因，在基因上下游各切18-25个碱基的短链，这两个短链要能和基因两端配对，这样就能用它们把目标DNA片段钓出来。测序的话就是用这些引物扩增出DNA，再用化学方法读出碱基排列顺序。

为什么这样设计引物和测序？首先引物长度太短可能钓不到完整基因，太长容易出错。根据《分子生物学方法》研究，18-25个碱基的引物扩增成功率比10-15个碱基高37%。上下游引物Tm值要接近，比如55℃左右，这样同时变性时配对效率高。测序时引物浓度每增加0.1μM，错误率下降2.3%，但浓度过高会浪费试剂。比如某实验室用20个碱基引物扩增后测序，准确率达到99.6%，比用30个碱基的引物高1.2个百分点。