WB提取蛋白就是先裂解细胞，用离心机甩出液体，接着跑电泳把蛋白分开，贴膜让抗体找目标蛋白，用化学发光显影看条带。关键要控制裂解时间，离心力别太猛，电泳缓冲液要没过胶，抗体孵育得泡够时间。

为啥是这个步骤呢？因为细胞裂解不彻底会漏蛋白，离心太慢上样不均，电泳时间短胶没跑透，抗体泡不够抗体不结合。比如离心要3500转/分12分钟，电泳跑2小时，抗体孵育1小时30分钟，数据表明这些参数能让蛋白转移率超90%。跑完电泳得用转膜仪把蛋白转到NC膜上，用TBST洗膜三次每次5分钟，封闭用5%脱脂牛奶1小时，一抗4℃过夜，二抗室温1小时。显影时用ECL试剂在化学发光仪上扫，条带位置和灰度能算蛋白含量。