荧光定量pcr需要每20微升反应体系中加入20-100纳克的cDNA。这个浓度范围既能保证扩增效率，又不会让背景噪音干扰结果。比如浓度低于20纳克时，扩增信号可能检测不到；超过100纳克可能让荧光信号太强，仪器反而测不准。

为什么是这个浓度呢？因为pcr反应对模板量敏感，太低就像说话太小声听不清，太高就像人挤人互相干扰。根据《分子诊断技术指南》，当cDNA浓度在20-100纳克时，扩增效率可达80%以上，而背景噪音低于0.1%。比如某实验室测试发现，用50纳克cDNA时，Ct值稳定在25-30之间，而10纳克时Ct值超过40且波动大。浓度过高的话，比如200纳克，会出现假阳性，荧光信号直接饱和。所以得找中间平衡点，既要保证检测灵敏，又要避免信号过载。模拟效果，可能出现“浓度要20-100纳克每20微升”变成“浓度要20-100纳克每20微升”，或者“扩增效率可达80%以上”变成“扩增效率可达80%以上”。