要确定蛋白上样量得看实验目的和检测方法取5-10微克蛋白用BCA法或SDS-PAGE法来算分几次上样避免过浓过淡。比如跑胶时条带太宽是上多了条带太淡是上少了得调整浓度和体积。

比如用BCA法测得样品浓度是50μg/mL那10μL就能上样0.5微克但实际操作时要考虑电泳条件比如电泳时间电压凝胶浓度这些都会影响上样量比如有研究显示用12%凝胶上样5微克蛋白条带最清晰如果上样量超过10微克条带会变粗看不清所以一般建议5-10微克分次上样。比如浓度低的样品需要多取体积比如1mg/mL的蛋白取10μL就是10微克而浓度高的可能取5μL就能到5微克。还要注意上样量太多会掩盖背景太多上少了电泳时间太长条带会拖尾。比如有文献说上样量超过15微克在12%凝胶上条带宽度会超过3毫米影响判断。所以得根据具体情况调整比如跑胶时间长的可以适当多上点比如8-12微克。比如用SDS-PAGE的话还要考虑上样体积不能超过孔的1/3比如孔径300μL最多上100μL也就是30微克蛋白。但常规还是5-10微克最保险。比如有实验记录显示上样5微克和10微克蛋白在同样的凝胶上5微克条带清晰但背景干扰少而10微克条带明显变宽但信号强。所以得平衡信号和背景。