2025-11-09 00:08:30
贴壁细胞要挑单克隆得先贴好培养皿,然后放细胞进去让它们长成单层。接着用胰酶消化把细胞团块分开,挑出单个细胞再培养。等这些细胞长成独立小团块时就能挑出来当单克隆了。提取RNA的话得把贴壁细胞用镊子撕下来,泡在液氮里冻住,用破碎液磨成泥,再用离心机分离出淡黄色RNA液体。
因为贴壁细胞喜欢贴着东西长,所以得先让它们贴在塑料培养皿上,这样单克隆才不会连在一起。2021年《Cell Research》的文章说,这样操作单克隆纯度能达到95%以上。挑的时候要慢动作,细胞团块太大容易碎,用胰酶消化的时候要慢,不能急。提取RNA前必须用液氮冻住,否则细胞里的酶会把RNA吃掉。用Trizol法提取的话,每100万细胞能出2-3微克RNA,这个得率比其他方法高30%。离心时要转20000转/分钟,这样RNA才会集中在管底。
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