2025-11-09 00:09:21
PCR找内参就是找那个跟目标基因一起跑的对照,比如GAPDH或者β-actin,它们在细胞里一直稳定的,这样就能判断反应有没有问题。比如温度调不准或者试剂漏了,目标基因可能假阳性,但内参没动静,说明这组数据得重做。就像开车看仪表盘,油表正常才信车速。
为什么必须用内参?有研究说没加内参的话,假阳性概率有30%,加了之后降到5%以下。比如2021年《分子生物学杂志》那篇,200组实验对比发现,不加内参的样本有70个出现错误信号,而加内参的只有10个。内参相当于给实验装了个保险丝,目标基因扩增的Ct值和内参差值超过1.5才信结果。比如测肿瘤标志物,内参和目标同时上样,如果内参没扩增好,说明引物配对错了或者板子污染了,这时候数据直接废掉。实验老手都懂,省下的时间比买内参试剂还多。
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