2025-11-09 00:09:57
配胶时加核酸染料得看目的和胶浓度配不配得上。比如做电泳看条带,染料多一倍会太亮盖住条带,少一半又看不清。胶浓度选1.5%-2.5%的常用胶,太稠跑得慢,太稀容易断条。得先调胶浓度再调染料量,否则胶太稠染料进不去,胶太稀染料跑太快。
为啥得这么配呢?因为核酸染料浓度和胶浓度是跷跷板关系。胶浓度1.5%-2.5%时,染料加到0.5μg/μL到2μg/μL最合适,数据证明浓度超过2.5%的胶,染料只能进去30%就堵死,导致条带模糊。比如用2%琼脂糖胶,染料最多加1.5μg/μL,超过这个量胶孔被染料堵死,电泳完条带像打水漂。胶浓度低于1.5%时,染料加到2μg/μL就跑出胶外,条带全在胶外飘。得先调胶浓度让染料能进胶孔,再慢慢加染料到0.5-2μg/μL范围,这样条带又亮又清晰。比如之前有实验把胶浓度调到3%,结果染料加到1μg/μL就跑不动,条带全在胶中间叠在一起。所以得先调胶浓度再调染料,就像先挖坑再填土,不能反过来。
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