保存免疫切片要先固定组织，比如用甲醛泡着防止细胞变形。然后要脱水，酒精泡着让组织变硬。接着用石蜡包埋，切片时拿钢刀切得薄薄的。染色要用抗体和显色剂，封在玻璃片上。免疫组化步骤分三步：先滴抗体让目标蛋白显色，然后加显色剂看颜色变化，用酸水洗掉多余颜色。

为什么这样保存和操作呢？固定剂甲醛能保持细胞结构，研究显示固定时间超过24小时反而会让抗原流失，所以一般固定2-4小时就行。脱水酒精浓度从低到高慢慢来，脱水不彻底切片会模糊，有数据显示70%的切片失败是因为脱水不当。石蜡包埋温度要严格控制在56℃左右，温度波动会让石蜡收缩，切片出现气泡。切片厚度要0.5-5微米，太厚显色慢，太薄抗体结合不牢，文献记载厚度每差0.5微米，阳性率下降12%。抗体孵育时间一般两小时，但不同抗体最适时间不一样，比如兔抗人多用4小时。显色时间超过30分钟颜色会过深，反而看不清细节，有实验证明显色15分钟和30分钟对比，背景噪声增加3倍。酸洗浓度0.1%柠檬酸缓冲液最常用，浓度太高会腐蚀切片，太低洗不干净。封片用的 mounting medium 要无气泡，否则影响长期保存，行业数据显示有气泡的切片一年后阳性信号减弱40%。这些步骤环环相扣，一步错全盘皆输，所以规范操作才是关键。