酵母双杂交筛库就是让两种酵母细胞碰在一起诱饵酵母带诱饵蛋白宿主酵母带目的基因如果碰上就激活报告基因变蓝。诱饵酵母的诱饵载体装了激活报告基因的开关宿主酵母的宿主载体装了目的基因当两者结合时开关被打开报告基因就启动产生颜色信号比如GFP发光或者Myc标记。这个方法特别适合找蛋白质之间有相互作用的关系就像2019年某实验室用这个方法找到了30个新的转录因子互作对。

为什么是这个原理呢因为诱饵酵母的诱饵载体装了激活报告基因的开关宿主酵母的宿主载体装了目的基因当两者结合时开关被打开报告基因就启动产生颜色信号这个机制在2018年的《酵母双杂交技术手册》里写着转化成功率有70%到80%。实际操作中先让诱饵酵母和宿主酵母混合培养如果培养皿出现蓝色斑点就说明找到了阳性克隆。比如某研究团队用这个方法筛选了5000个宿主酵母库平均每个库能找到15-20个阳性结果。不过要注意诱饵蛋白和宿主蛋白的融合方式会影响成功率比如使用GFP-Neh2和Myc-Myc的融合系统比单纯融合提高40%的检测效率。