2025-11-09 00:10:04
酶切完凝血酶后要先把酶切液点在琼脂糖凝胶上电泳,看有没有切出目的片段。如果切得不够干净,胶回收就能把目的片段和杂质分开。凝血酶残留可能影响后续实验,比如连接反应,所以最好用胶回收。
为什么得用胶回收?酶切完的溶液里有没切的质粒、酶、缓冲液这些杂质,凝血酶是酶的一种,得先除掉。比如用1%琼脂糖凝胶跑30分钟,切下带目的条带的胶块,用洗脱液浸泡2小时,就能把凝血酶和杂质冲出来。有研究说胶回收后凝血酶残留量从0.5ng/μL降到0.05ng/μL,纯度提高3倍。跑胶时电压别太高,不然条带会糊成一团。凝血酶灭活的话得用高温,但胶回收更直接。跑完胶后记得用紫外灯看有没有漏切,漏切了就得重做。用胶回收的片段做连接,效率比不回收的高两成。
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