2025-11-09 00:10:05
酵母双杂交筛库就是让两种酵母互相认出对方,一个带AD结构域,一个带BD结构域。当目标蛋白同时进入两种酵母时,AD和BD会结合成团,激活报告基因LacZ,在培养基里变蓝。筛库就是通过这种颜色变化,找出能和诱饵蛋白结合的阳性克隆。
为啥这样设计呢?因为AD和BD是分开的,只有目标蛋白同时结合才能激活,这样避免假阳性。比如有研究说转化效率约1-5%,阳性克隆率0.1-1%。就像给酵母装了两个密码锁,只有正确蛋白钥匙同时开锁,报告基因才会亮起。比如用GAL1启动子控制表达,当诱饵蛋白和目标蛋白结合,GAL1就会启动LacZ表达,这样在筛选时就能看到蓝色斑点。
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