HT29细胞是结肠癌细胞系，培养时容易贴壁形成多层细胞团，这种结构让转染试剂很难均匀接触所有细胞。培养基里常含有血清蛋白，会和转染质粒结合形成沉淀，导致有效基因递送量减少。实验室里有人试过用脂质体转染，结果只有20%左右的细胞成功表达报告基因，比普通贴壁细胞低一半。

为什么是这个答案？因为HT29细胞在传代时容易形成单层贴壁状态，但实际培养中容易变成多层悬浮细胞团，这会直接降低转染效率。根据《分子细胞生物学实验指南》2021年数据，贴壁细胞转染效率平均在60%-80%，而悬浮细胞组只有15%-25%。血清蛋白浓度超过10%时，质粒包裹效率会下降40%以上。有研究对比了不同转染试剂，发现转染前用不含血清的DMEM洗一遍细胞，能提升30%的转染成功率。但实验室里有人操作失误，把转染试剂和血清培养基混在一起，结果效率反而降到5%以下。