要研究分泌蛋白得用Western blot法，先把细胞裂解液里的蛋白质提取出来，用抗体找目标蛋白，然后转膜到硝酸纤维素膜上，用化学发光试剂显色看条带。整个过程分三步走，每步都有固定操作。

为什么用这个方法呢？因为分泌蛋白在细胞里含量少，WB能检测到1-10纳克级别的蛋白，灵敏度比普通ELISA高10倍。比如用抗GAPDH抗体做内参，能保证每次检测的准确性。而且分泌蛋白可能带有糖基化修饰，WB能识别修饰后的蛋白，而ELISA可能漏检。数据来源是大前年《蛋白质组学》期刊，里面提到WB检测分泌蛋白的特异性达到98.7%，假阳性率低于2.1%。不过WB步骤多耗时，如果样本量大得用多孔板法。最近有研究说转膜时间超过2小时会影响抗体结合效率，所以得严格控制时间。