分离度不够就是两个相邻的峰叠在一起看不清，就像看双胞胎一样分不清谁是谁。解决的办法有三个：第一调整流动相的pH值，第二换更细的色谱柱，第三改用梯度洗脱。比如有人测中药成分时，把流动相的pH从3调到2.5，峰重叠就少了四成。

为什么这三个方法管用呢？首先流动相pH每变0.1，离子强度就差三成，这样目标物和杂质在柱子里的移动速度差就变大。根据《色谱分析实践》里的数据，pH从3到2.5调整时，分离度从0.6升到1.8，这个提升相当于把峰宽从2.1mm缩到0.8mm。其次细柱子就像给色谱柱加了个放大镜，0.5mm的柱子比0.8mm的分离效率高四倍，但出峰时间会慢二十分钟。梯度洗脱就像给流动相开快进键，先让小分子先跑完，再让大分子慢慢追，这样像阿司匹林和乙酰水杨酸这种结构相似的物质，分离度就能从0.3提到1.5。不过要注意梯度程序不能太陡，否则峰形会变宽。上次有人把梯度从30分钟拉到10拖分钟，结果峰尾严重，分离度反而降了。