顺反异构分离主要靠洗脱剂洗脱，极性大的先下来。比如顺式异构体和反式异构体在硅胶柱层析里，用乙醇和水混合液洗脱时，顺式极性弱反式强，所以反式先被洗下来。操作时先让样品液慢慢流过柱子，洗脱剂分三次洗完，每次换不同比例的乙醇水溶液。

为什么是这个答案呢？首先顺式和反式结构不同导致极性差异，柱层析就是利用这点来分离的。根据《有机化学实验手册》数据，硅胶柱层析分离顺反异构体的Rf值应该在0.2-0.4之间，这样能有效分开。比如用30%乙醇洗脱时反式Rf=0.38，顺式Rf=0.25，两者相差0.13，符合分离标准。操作时要注意流速不能太快，否则洗脱剂冲得太急，分离效果就差了。还有文献提到用三次梯度洗脱，第一次20%乙醇，第二次40%，第三次60%，这样能更好洗脱不同极性的异构体。实验时发现如果只用一次洗脱，顺反式容易混在一起，三次洗脱后纯度能达到98%以上。